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QB 2394 —1998

　　國家輕工業(yè)局1998 —08 —17 批準(zhǔn) 1999 —05 —01 實(shí)施

　　前 言

　　本標(biāo)準(zhǔn)非等效采用美國食品用化學(xué)品法典（FCC IV 1996）有關(guān)部分。由于

　　英國阿普林巴雷特公司（Aplin &Barret Ltd）是世界上首產(chǎn)乳酸鏈球菌素

　　產(chǎn)品廠家，其質(zhì)量較好，技術(shù)較*，因此，鑒別及效價(jià)測定是參照FAO/WHO 1969

　　及營養(yǎng)會議報(bào)告集No.4，也就是英國阿普林 巴雷特公司現(xiàn)用的方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由國家輕工業(yè)局行業(yè)管理司提出。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由全國食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心、衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所技術(shù)歸口。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由浙江天臺制藥廠銀象分廠、中國食品發(fā)酵工業(yè)研究所、中科院微生

　　物研究所負(fù)責(zé)起草。

　　本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：姚日標(biāo)、劉蓮芳、吳玉宏、還連棟。

　　中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

　　食品添加劑 乳酸鏈球菌素

　　QB 2394 —1998

　　1 范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品添加劑——乳酸鏈球菌素的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)

　　則及包裝、標(biāo)志、貯存、運(yùn)輸?shù)母黜?xiàng)要求。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于由乳酸鏈球菌經(jīng)微生物發(fā)酵提取而獲得的天然的乳酸鏈球菌

　　素。在食品工業(yè)中作為防腐劑。

　　2 引用標(biāo)準(zhǔn)

　　下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)

　　準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討

　　使用下列標(biāo)準(zhǔn)版本的可能性。

　　GB 5009.3 —1985 食品中水分測定方法

　　GB 8450 —1987 食品添加劑中砷的測定方法

　　GB 8451 —1987 食品添加劑中重金屬*試驗(yàn)法

　　GB 5461 —1992 食用鹽

　　GB 4789.2 —1994 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定

　　GB 4789.3 —1994 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群測定

　　GB 4789.4 —1994 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)

　　3 分子式、分子量

　　分子式：C143H228O37N42S7

　　相對分子量：3348

　　4 技術(shù)要求

　　QB 2394 —1998

　　國家輕工業(yè)局1998 —08 —17 批準(zhǔn) 1999 —05 —01 實(shí)施

　　4．1 外觀：灰白略帶黃色粉末。

　　4．2 理化指標(biāo)：見表1 。

　　表1

　　項(xiàng) 目指 標(biāo)

　　效價(jià) （（IU/mg）≥900

　　干燥失重 %%≤3

　　砷（以As 計(jì)）%≤0.0003

　　重金屬（以Pb 計(jì)）%≤0.002

　　氯化鈉 %%≥50

　　4．3 微生物指標(biāo)：見表2 。

　　表2

　　項(xiàng) 目指 標(biāo)

　　菌落總數(shù) （（cfu/g）≤10

　　大腸菌群（MPN/100g）≤30

　　沙門氏菌25g 中不得檢出

　　5 試驗(yàn)方法

　　本標(biāo)準(zhǔn)所用的試劑和水，在沒有其它特殊要求時(shí)，均使用分析純試劑和蒸餾

　　水或相當(dāng)純度的水。

　　5．1 鑒別

　　α-*對乳酸鏈球菌素具有專一性，在乳酸鏈球菌素中加入α-

　　*（根據(jù)酶活力而定），乳酸鏈球菌素活性立即消失。同時(shí)，乳酸鏈

　　球菌素?zé)岱€(wěn)定性與其它蛋白相比具有特殊性，pH 值為2 的乳酸鏈球菌素水懸液，

　　121 ℃，30min，乳酸鏈球菌素活力保持不變。

　　5．2 效價(jià)的測定

　　5．2．1 試劑和溶液

　　5．2．1．1 0.02mol/L 鹽酸。

　　5．2．1．2 1.5%的Tween（吐溫）-20 。

　　5．2．1．3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

　　準(zhǔn)確稱取乳酸鏈球菌素標(biāo)準(zhǔn)樣品，懸浮于0.02mol/L 鹽酸中，使?jié)舛葹?

　　2mg/mL，搖勻，用0.02mol/L 鹽酸稀釋成300，600 倍，即成高低劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液。

　　5．2．1．4 培養(yǎng)基為S1 ,其配方為：

　　胰蛋白胨0.8%酵母膏0.5%

　　葡 萄 糖0.5%氯化鈉0.5%

　　*0.2%瓊 脂1.6%

　　5．2．1．5 菌株懸浮液的制備

　　用接種環(huán)取一環(huán)己培養(yǎng)好的檢測菌（黃色微球菌，NCIB 8166）放于6mL 滅

　　菌生理鹽水中，充分震蕩、混勻，即成。

　　5．2．2 測定步驟

　　5．2．2．1 樣品溶液的配制

　　QB 2394 —1998

　　國家輕工業(yè)局1998 —08 —17 批準(zhǔn) 1999 —05 —01 實(shí)施

　　稱取一定量的樣品，用0.02mol/L 鹽酸溶解后，稀釋成高低劑量樣品溶液，

　　具乳酸鏈球菌素含量，按估計(jì)單位高、低劑量與標(biāo)準(zhǔn)品溶液大致相當(dāng)。

　　5．2．2．2 平板的制備

　　將S1 培養(yǎng)基冷卻至約70 ℃，加入1.5%Tween -20 充分混勻，待冷卻至50 ℃。

　　加6mL 菌株懸浮液，混勻后小心倒入已水平放置的平板上，待凝固后，放置無菌

　　室內(nèi)約1h，置4 ℃冰箱存放至次日使用。使用前用打孔器在平板上打出所需的孔

　　數(shù)，小心棄去孔中瓊脂塊。

　　5．2．2．3 滴加溶液

　　用取樣器向瓊脂孔滴加等量的高、低劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液。

　　5．2．2．4 恒溫培養(yǎng)

　　滴加樣品溶液后，水平移入30 ℃恒溫箱中培養(yǎng)20h～24h 。

　　5．2．2．5 測量與計(jì)算

　　用卡尺測量抑菌圈直徑，取其平均值，按下式計(jì)算：

　　K X X X X

　　X X X X

　　C

　　C

　　BL SL BH SH

　　BL BH SL SH

　　BH

　　sH

　　lg ) ( ) (

　　) ( ) ( lg ×+−+

　　+−+ =

　　式中：CSH ——樣品溶液的效價(jià)，IU/mg；

　　CBH ——標(biāo)準(zhǔn)溶液的效價(jià)，IU/mg；

　　XSH ——高劑量樣品溶液所致的抑菌圈直徑，mm；

　　XSL ——低劑量樣品溶液所致的抑菌圈直徑，mm；

　　XBH ——高劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液所致的抑菌圈直徑，mm；

　　XBL ——低劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液所致的抑菌圈直徑，mm；

　　K ——高劑量倍數(shù)與低劑量倍數(shù)的比值。

　　若樣品估計(jì)值不在測定值的90%～110%范圍內(nèi)，應(yīng)從新估計(jì)樣品效價(jià)，重測。

　　5．3 干燥失重的測定

　　按GB 5009.3 測定。

　　5．4 砷的測定

　　按GB 8450 測定。

　　5．5 重金屬的測定

　　按GB 8451 測定。

　　5．6 氯化鈉的測定

　　稱取樣品5.00g～10.00g 于坩堝中，小火炭化至內(nèi)容物易壓碎為止。用水將

　　炭化物移入100mL 容量瓶中，加水至刻度。將上述稀釋液過濾，吸取濾液25mL

　　于三角瓶中，加入*指示劑（3～4）滴，用0.1mol/L *溶液滴定至淡

　　粉紅色。

　　按GB 5461 測定。

　　5．7 菌落總數(shù)的測定

　　按GB 4789.2 測定。

　　5．8 大腸菌群的測定

　　按GB 4789.3 測定。

　　5．9 沙門氏菌的檢驗(yàn)

　　按GB 4789.4 檢驗(yàn)。

　　6 檢驗(yàn)規(guī)則